自血穴位注射疗法的研究方向

（一）一氧化氮在动物实验（如动物肺功能等）中的意义

2015年GINA《哮喘管理和预防的全球策略指南》中提到，一氧化氮呼出气在一些中心能被测量。一氧化氮呼出气在嗜酸性粒细胞性哮喘，同时在非过敏性条件（例如嗜酸性粒细胞性支气管炎和过敏性鼻炎），并且不认为是哮喘的有用的诊断。一氧化氮呼出气在吸烟患者和在支气管狭窄时是减少的，在病毒性呼吸系统感染的病人（主要是非吸烟者），在没有特异性的呼吸系统症状时，一氧化氮呼出气可增高和减少，一氧化氮呼出气＞50ppb是对ICS治疗有好的短期效应。然而，检测不用ICS安全性没有长期的研究。因此，一氧化氮呼出气目前不能被推荐为决定是否用ICS治疗可能患哮喘的病人。而NO指标是否能有助于哮喘的诊断以及指导临床治疗，则有待进一步的实验研究。

（二）近年来哮喘动物模型的机理研究评价指标

近年来，为研究哮喘发病机理和药物作用机理，学者们从气道炎症，免疫变态反应，神经-受体失衡等方面探讨检测指标，对模型进行评价。

1．对EOS浸润致气道炎症的影响

崔德健等用免疫组化法分别测定血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）和嗜酸性细胞趋化因子（Eotaxin）及转录调控因子核因子（NF）κB、活化蛋白-1（AP-1）在段支气管及细支气管肺泡区的蛋白表达，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定肺组织匀浆VCAM-1及Eotaxin的mRNA表达，电泳迁移实验（EMSA）测定肺组织匀浆（NF）κB及AP1的DNA结合活性。研究支气管哮喘时EOS选择性粘附分子—VCAM-1和Eotaxin及（NF）κB、AP-1在大、小气道及肺组织中的表达，探讨EOS趋肺的机制。朱述阳等用瑞氏染色计数骨髓涂片和外周血涂片中白细胞比例，免疫组织化学技术检测骨髓中嗜酸粒细胞趋化因子受体3（CCR3）的表达，原位分子杂交技术检测肺组织中EotaxinmRNA，免疫组织化学技术检测Eotaxin在肺组织中的表达，观察哮喘豚鼠肺和骨髓组织EotaxinCCR3表达的变化及糖皮质激素对其影响，探讨哮喘用激素干预的可能机制。

2．对免疫变态反应的影响

李超乾等采用流式细胞术，测定BALF中CD2+、CD28+及γδTCR+T细胞占总淋巴细胞的百分率及平均荧光密度（MIF）；用原位杂交法，检测肺组织中IL-4mRNA和IFN-γmRNA的表达；用酶联免疫吸附法（ELISA）法检测血清IL-4和IFN-γ的浓度。通过这些指标的关联性，探讨Th1/Th2细胞失衡影响免疫应答的机制。

3．对神经-受体关系的影响

陈国蓉等采用免疫组织化学法检测与气道重构相关的细胞因子—转化生长因子β1，根据β1在动物支气管和肺组织中的蛋白表达，观察β1对气道重构的影响。汪俊等光镜和电镜下观察大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞（AMCC）的组织结构和超微结构改变，免疫组织化学结合显微图像分析观察AMCC中神经生长因子（NGF）的表达变化，ELISA检测血清中肾上腺素和去甲肾上腺素的变化。通过观察支气管哮喘状态下大鼠AMCC形态和功能的改变以及NGF在AMCC中的表达，探讨AMCC与支气管哮喘的关系。高海鹏等用RT-PCR及原位杂交方法测定哮喘时外周淋巴细胞及肺组织β2ARmRNA水平，初步探讨β2ARmRNA在支气管哮喘发病中的变化。

4．其他指标影响

张秀峰等收集支气管哮喘豚鼠的BALF，上清液作谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）浓度测定，沉淀作细胞涂片，行免疫组化和原位杂交，检测γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）蛋白和mRNA，探讨支气管哮喘豚鼠BALF中炎症细胞γ-GCS的表达。Feng等以工具药Flou3AM为细胞内钙离子示踪剂，观察气道平滑肌细胞（ASMCs）在工具药作用下细胞内钙离子浓度，检测哮喘豚鼠ASMCs内钙释放通道功能的改变，探讨与支气管哮喘的关系。Maution等用免疫组化方法结合显微图像分析测定气道平滑肌基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶-9抑制剂（TIMP-1）免疫反应的变化，MMP-9、TIMP-1阳性细胞百分比及BALF中细胞总数，观察实验性哮喘豚鼠BALF及平滑肌中MMP-9、TIMP-1的表达及平衡变化趋势。

总之，经络注血疗法作为一种正在兴起的治疗哮喘的有效方法，有必要对该疗法进行进一步的机理研究，以促进人们对该疗法的认识。实验者可借鉴现有的哮喘实验动物模型资料，探讨经络注血疗法对哮喘的作用机理。该疗法的机理方面研究可根据各实验研究需要，选择具有一定代表性的指标，从不同角度反映不同原因诱发的哮喘的某些特征，通过这些指标的互相关联性，促进人们对这种疾病的发病机制以及病理生理学的认识。当然由于哮喘病因复杂，必然造成哮喘动物模型指标的的复杂性，差异性，实际实验中不能生搬硬套，需辨别在不同模型复制过程中的检测指标存在的差异问题，结合实际需要，遴选客观指标。