化痰平喘镇咳口服液治疗支气管哮喘的实验研究
           老昌辉 李俊雄 卢梅生 杨裕忠 *俞瑜 *吴清和               
        广东省南海市中医院（528200） *广州中医药大学（510407）
  化痰平喘液由我院老昌辉院长经验方研制而成,主治支气管哮喘,临床疗效显著
。本实验旨在探讨化痰平喘液治疗支气管哮喘的作用机理。
            材料与方法
主要材料
动物 SD大白鼠(合格证号:97A018)
；NIH系小白鼠(合格证号:97A017)；豚鼠,均由广东省卫生厅医用动物场购入。
药物与试剂  甲醛,分析纯,广东台山化工厂出品
。枸缘酸钠,分析纯,上海试剂一厂出品。炭酸氢钠,分析纯,上海虹光化工厂出品。酚红,上海试剂三厂出品。乙酰胆碱,上海化学试剂总厂出品。组胺,上海丽珠东风生物技术有限公司 。
主要仪器  722光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂产品),CSW-613型雾化器(广东汕头光电研究所生产
)。
方法和实验步骤
抗菌作用实验（体外抑菌试验）
（1）本实验菌种选用9种有代表性的主要是呼吸道感染的常见病源菌和条件治病菌，包括金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎球菌、卡它球菌、白喉杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌。菌种来自北京卫生部生物制品研究所。实验时，用肉膏汤配制成每ML含生药量（橘红痰咳液则为每ML含原药重量）0.4g、0.2g、0.1g……0.0125g共6个药物浓度，
每管总量1ML，流通蒸气灭菌。对链球菌的试验尚需在灭菌药液中添加1%葡萄糖，对肺炎球菌和白喉杆菌则另加10%兔血清，对白色念球菌的试验应用沙保氏培养液配置药液。空白对照为不含药物的培养基。每排药液化的各个浓度管及空白对照管分别加入10ˉ 3试验菌液（8小时培养物）0.1ML，37°C 培养18小时观察结果。对白色念珠菌 的试验报告则用24小时培养物，药液加菌 液后培养48小时观察结果，判定最小抑菌 浓度（MIC ）， MIC 是指定完全抑制试验菌种生长的所含的最小药物浓度。
抗炎作用实验
对大鼠蛋清性足肿胀的影响
   选取健康雄性大鼠55只，体重为
130-150g，随机分为6组，每组动物9-10只，然后分别灌胃给药，阳性对照组设橘红痰咳液和阿司林组。对照组给予等量生理盐水。实验时，按文献方法制备蛋清性组肿模型，以致炎后1、2、3、4小时的足肿容积，并计算足肿胀度，比较各组的差异。
对大鼠甲醛性足肿胀的影响
   选取健康雄性大鼠55只，体重为
140-160g，分组和给药方法同前。实验时，先灌胃给药1次，药后1小时按文献方法制备甲醛性足肿胀模型。 第2天至第6天继续给药并测定足肿容积，每天1次。给药后1、2、3、4、5天结果计算足肿胀度，比较各组的差异。
对大鼠棉球肉芽肿的影响
   选取健康雄性大鼠55只，体重
140-160g，分组和给药方法同前。实验时，按文献方法将两个灭菌棉球经大鼠胸部切口，分别植入两侧腋窝皮下。术后当天开始给药，每天1次，连续7天，第8天颈椎脱臼致死，取出棉球置于90°C 烘箱干燥1小时，取出称重，减去原棉求重量，换算成毫克肉芽重/100g体重，比较各组差异。

止咳作用实验
豚鼠枸缘酸喷雾引咳法
选取健康敏感豚鼠60只（5分钟内咳嗽次数少于10次者不用），体重
250-280g，雌雄各半，分组和给药方法同前。实验时，各组分别灌喂给药，1小时后（可待因30分钟），让豚鼠置于3L容积密封的玻璃钟罩内，用超声雾化器恒压喷入17.5%枸缘酸1分钟，观察豚鼠咳嗽的潜伏期，并记录7分钟内豚鼠咳嗽的次数。

化痰作用实验
对小白鼠气管段酚红排泌量的影响

选取小鼠50只，体重
18-22g，雌雄各半，分组和给药方法同前。给药半小时后腹腔注射酚红0.1ml/10g体重，半小时后处死动物，剥去气管周围组织，减下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管，放进盛有2ml生理盐水的试管中，再加0.1ml NAOH，用722型分光光度计、波长546nm， 测OD值。同时，用分析天平准确称取一定量酚红以5g/dl碳酸氢钠溶解，使1ml含酚红1000μg，依次稀释成每ml含酚红0.01、0.1、0.5、0.7、1、3、5μg，测OD值，以酚红剂量为横坐标，OD值为纵.坐标，作出标准曲线，并计算出每鼠酚红排泌量。
平喘作用实验
整体动物引喘法
实验选用经预反应堆  潜伏期合格（2分钟）的豚鼠60只，雌雄各半，分组及给药方法同前，阳性对照药选用氨茶碱和罗汉果定喘片。药后30分钟，将豚鼠置于3L容积雾化器恒压喷雾15秒，记录豚鼠吸入药物后出现哮喘反应（即呼吸困难和抽搐跌倒）的潜伏期。

结果
1．抗菌实验结果
                   表1.药物的抑菌作用
——————————————————————————————
                                   MIC（g/ml）
药物  金黄色  甲型溶血 乙型溶血 肺炎 卡它 白喉  大肠 绿脓 白色
     葡萄球菌 性链球菌 性链球菌 球菌 球菌 杆菌  杆菌 杆菌 念球菌
化痰   
平喘液   0.10   0.40      0.10     0.20  0.40  0.20  >0.40 >0.40  0.40
橘红痰咳
口服液   0.40   0.40      0.40     0.40  >0.40  0.40  >0.40 >0.40  0.40

   注：空白对照管的实验菌均生长正常。
   表1结果表明，化痰平喘液对所试菌种均有不同程度的抗菌作用，其中对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎球菌和白喉杆菌的作用稍强于其它所试菌种。
2．抗炎实验结果
 1）对大鼠蛋清性足肿胀的实验结果  

   表2
.对大鼠蛋清性组肿胀的影响（X±SD）
       
 N    剂量               致炎后不同时间（h）组肿胀度
                         ———————————————————
组别     只   g/kg      1           2          3          4
对照      10   -    0.96±0.09   0.76±0.10  0.68±0.10  0.56±0.11
阿司       9  0.2   0.76±0.15** 0.51±0.11** 0.38±0.09** 0.24±0.10**
匹林
橘红痰咳液 9  10    0.94±0.16  0.67±0.15  0.61±0.15  0.55±0.14
化痰平喘液 9  2.5   0.93±0.07  0.83±0.11   0.47±0.16  0.27±0.1**
 5    0
.80±0.14**  0.70±0.13  0.51±0.14  0.25±0.1**
              9  10  0.68±0.14**  0.54±0.13**  0.38±0.14** 0.24±0.1**

  表2结果表明，化痰平喘液 大剂量对蛋清所致的大鼠足肿胀有明显的抑制作用，与对照组比较，差异有非常显著性（P
<0.01）；中剂量组对致炎后1小时、4小时的足肿胀度有明显的抑制作用（P<0.01），小剂量组对致炎后4小时的足肿胀度有明显的抑制作用（P<0.01），阳性对照药阿司匹林也有明显的抑制作用（P<0.01）。
对大鼠甲醛性足肿胀的实验结果
  表3
.对大鼠甲醛性足肿胀的影响（X±SD）
组别  N 剂量                病致后不同时间（d）足肿胀度
              —————————————————————————  
      只 g
/kg    1           2          3          5           6
对照  10   -  0.71±0.11  0.66±0.13  0.58±0.13  0.54±
0.11  0.41±0.09
阿斯  9  0.2 0.46±0.10** 0.39±0.11* 0.29±0.12** 0.31±0.09** 0.20±0.09**
匹林           
橘红  9  10  0.66±0.12  0.51±0.10* 0.42±0.13*  0.39±0.11**  0.32±0.12
痰咳液
化痰  9  2.5  0.61±0.13   0.56±0.14  0.49±0.12  0.43±0.19   0.33±0.17
平喘液
   9   5  0
.63±0.19   0.58±0.13  0.50±0.14   0.47±0.15   0.35±0.14
   9  10  0.70±0.22  0.50±0.13* 0.40±0.10*  0.39±0.12** 0.26±0.09*
表3结果表明，化痰平喘液大剂量组对甲权性足肿胀在致炎后2、3、4
.5天均有明显的抑制作用（P<0.05-0.01），中、小剂量组无明显抑制作用（P>0.05）；阿司匹林对致炎后1-5天足肿胀均有明显的抑制作用（P<0.01），橘红痰咳液对致炎后第2、3、4天足肿胀有明显的抑制作用（P<0.05-0.01）。
对大鼠棉球肉芽肿的实验结果
表4
.对大鼠棉球肉芽肿的影响（X±SD）
           组别       N           剂量                肉芽肿重量        
                   只           g/kg                mg/100g
        对照        10          -                   84
.9±11.6
        阿司匹林  
 9           0.2                 47.1±7.9**
        橘红痰咳液  9           10                 68.8±14.3*
        化痰平喘液  9           2.5                 72.2±9.2*
                     9           5                  63.4±8.9**
                     9           10
                 60.7±5.6**
表4结果表明，化痰平喘液各剂量组均可明显减轻大鼠棉球肉芽中重量，与对照组比较，差异有非常显著性（P
<0.05-0.01）；阿司匹林及橘红痰咳液也有明显的抑制作用（P<0.05-0.01）       
3．止咳实验结果
        表5
.对豚鼠枸缘酸喷雾引喘的影响（X±SD）
组别         N   剂量    咳嗽潜伏期             咳嗽次数
             只   g/kg         s                    7m
in
——————————————————————————————
对照         10    -       29.5±17.5             48.9±13.2
可待因       10   0.03     87.6±21.1**           15.1±5.9**
橘红痰咳液   10   10       59.4±24.9**          30.2±19.0*
化痰平喘液   10   2.5      58.6±24.8**           39.0±14.6
              10   5       60.0±17.2**           35.7±12.1*
              10   10      65.7±25.3**           25.5±10.3**
表5结果表明，化痰平喘液各剂量君可明显延长枸缘酸喷雾致咳的潜伏期（
P<0.01），大、中剂量均可明显减少7分钟内的咳嗽次数（P<0.05-0.01）。可待因和橘红痰咳液亦可明显延长咳嗽潜伏期，减少咳嗽次数（P<0.05-0.01）。
4．化痰实验结果
对小白鼠气管段酚红排泄泌量的影响
      表6
.对小白鼠气管段酚红排泌量的影响（X±SD）
   组别
          N            剂量            气管段酚红排泌量
                    只            g/kg                μg/ml
对照             10             -                 0.12±0.11
橘红痰咳液       10            10                0.24±0.13*
化痰平喘液       10            2.5                0.18±0.11
                 10             5                 0.39±0.20**
                  10            10                0.54±0.16**
表6结果表明，化痰平喘液大、中剂量均可增加小鼠气管的酚红排泌量，与对照组比较，差异有非常显著性（P<0.01），而小剂量作用不明显（P>0.05）；橘红痰咳液亦可明显增加酚红的排泌量（P<0.01）。
5
．对平喘的实验结果
        表7.对豚鼠实验性哮喘潜伏期的影响（X±SD）
   组别          N       剂量          哮喘潜伏期
                 只       g/mg            s               
对照             10        -             51.4±11.5
氨茶碱           10      0.125          158.2±14.8**
罗汉果定喘片     10        2.5           79.4±18.1**
化痰平喘液       10        2.5           64.5±7.91**
                  10         5           74.2±18.2**
                  10        10           82.5±26.2**
表7结果表明，化痰平喘液各剂量均可延长豚鼠的哮喘潜伏期，与对照组相比，差异有非常显著性（P<0.01），氨茶碱及罗汉果定喘片亦可明显延长豚鼠的哮喘潜伏期（P<0.01）。         

讨论
  化痰平喘液由麻黄，地龙，浙贝母,全瓜篓,鱼腥草等中药组成
。具有化痰，平喘,镇咳的功效,临床上用于治疗支气管哮喘等取得较好疗效。方中麻黄,地龙等具有宣肺平喘作用;浙贝,瓜篓等具有化痰止咳作用;鱼腥草具有清热解毒作用.诸药共奏宣肺化痰,平喘止咳之功。
  实验结果表明,化痰平喘液对常见的呼吸道感染的病原菌和条件致病菌均有不用程度的抑菌作用,其中对金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌,肺炎球菌,白喉杆菌的抑制作用较强于其它菌种
。 化痰平喘液对大鼠蛋清性足肿胀,大鼠甲醛性足肿胀以及大鼠棉球性肉芽肿均有不同程度的抑制作用,表明化痰平喘液可降低毛细血管通透性,减少渗出,抑制纤维组织的增生而具有抗炎作用。化痰平喘液对枸缘酸钠引起的豚鼠咳嗽可延长其潜伏期和减少咳嗽次数表明化痰平喘液有镇咳作用。化痰平喘液能明显增加小白鼠气管段酚红排泄量,表明化痰平喘液具有化痰作用。其化痰作用是通过增加气管的分泌来实现的。化痰平喘液能明显延长豚鼠实验性哮喘潜伏期,表明化痰平喘液具有平喘作用。
  综上所述,化痰平喘液具有抑菌,抗炎,镇咳,化痰,平喘的作用,为临床用于支气管哮喘,上呼吸道感染,急慢性支气管炎,肺部感染等所致的痰多,咳嗽,喘促的治疗提供了药理学依据
。